G2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401866

Descripción general

GPR132 codifica el receptor acoplado a proteína G G2A, un sensor inmunorregulador implicado en el tráfico de leucocitos y en las respuestas a señales inflamatorias. G2A puede activarse por la acidificación extracelular y por lípidos bioactivos, como derivados oxidados de ácidos grasos, lo que conecta el estrés tisular con la señalización mediada por GPCR a través de proteínas G heterotriméricas y de vías posteriores como MAPK y rutas dependientes de calcio. En las células inmunitarias, la señalización de G2A influye en la quimiotaxis, el estado de activación y programas ligados a citocinas que moldean los microambientes inflamatorios. La expresión o señalización desregulada de GPR132 se ha asociado con inflamación crónica e interacciones entre tumor y sistema inmunitario, por lo que resulta relevante para estudios mecanísticos en inmunología y biología del cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO G2A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GPR132 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GPR132 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GPR132 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína G2A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GPR132 para la investigación de la señalización de G2A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GPR132 críticos para la función de G2A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GPR132 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido G2A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido G2A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GPR132. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR G2A (h) y el plásmido HDR G2A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GPR132 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GPR132 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.