FRP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402000-ACT

O gene humano **SFRP2** codifica a **proteína secretada relacionada a Frizzled 2** (FRP-2), um modulador solúvel da sinalização **Wnt** que se liga a ligantes Wnt e a receptores **Frizzled** para moldar programas transcricionais dependentes de **β-catenina**. Ao ajustar a intensidade da via Wnt, a FRP-2 influencia decisões de destino celular, proliferação, migração e remodelação da matriz extracelular ao longo do desenvolvimento e na homeostase de tecidos adultos. Alterações na expressão de **SFRP2** e na sua regulação epigenética têm sido associadas à desregulação da atividade **Wnt/β-catenina** observada na biologia do câncer, bem como a microambientes fibróticos e inflamatórios. Essas propriedades tornam **SFRP2** um alvo útil para estudar sinalização parácrina, interações estroma–epitélio e o crosstalk entre vias que afetam a diferenciação e a remodelação tecidual.

FRP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SFRP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FRP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SFRP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SFRP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FRP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SFRP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FRP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FRP-2 em células tumorais com expressão de SFRP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.