Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fra2: sc-400250-ACT

Le gène humain **FOSL2** code **Fra2** (antigène 2 de type FOS), un facteur de transcription bZIP qui s’hétérodimérise avec des protéines **JUN** pour former des complexes **AP-1** régulant l’expression de gènes dépendants des stimuli. Fra2 intègre les voies de signalisation **MAPK/ERK** et **JNK** afin de contrôler des programmes liés à la progression du cycle cellulaire, à la différenciation, au remodelage de la matrice extracellulaire et aux réponses inflammatoires. Une activité FOSL2/AP-1 dérégulée a été associée à des états transcriptionnels oncogéniques, à la fibrose tissulaire et à l’inflammation chronique, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel des voies du stress et des facteurs de croissance. Les réseaux régulateurs dépendants de Fra2 sont couramment étudiés dans des contextes tels que la transition épithélio-mésenchymateuse, l’activation du stroma et la signalisation induite par les cytokines.

Fra2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOSL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fra2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOSL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOSL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fra2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOSL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fra2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fra2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOSL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.