Flt-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400684-ACT

FLT4 codifica o receptor tirosina-quinase humano Flt-4 (VEGFR-3), um nó central de sinalização em células endoteliais linfáticas que se liga a VEGF-C e VEGF-D para regular a linfangiogênese, o remodelamento vascular e a sobrevivência endotelial. Após o engajamento do ligante, o Flt-4 ativa vias a jusante incluindo PI3K–AKT, MAPK/ERK e PLCγ–PKC para coordenar respostas de proliferação, migração e permeabilidade. A sinalização desregulada de FLT4 está implicada no desenvolvimento linfático anormal e na homeostase de fluidos teciduais, sendo frequentemente estudada no contexto da linfangiogênese associada a tumores e da disseminação metastática. Como um receptor de membrana com saídas de sinalização dependentes do contexto, FLT4 serve como um alvo acessível para investigar a dinâmica ligante–receptor, o tráfego do receptor e a comunicação cruzada entre vias na biologia vascular.

Flt-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FLT4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Flt-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FLT4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FLT4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Flt-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FLT4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Flt-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Flt-4 em células tumorais com expressão de FLT4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.