Flk-1/KDR/VEGFR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400118-ACT

KDR codifica o receptor tirosina-quinase VEGFR2 (Flk-1/KDR), um nó de sinalização principal das respostas endoteliais vasculares induzidas por VEGF. Após a ligação do ligante e a autofosforilação do receptor, o VEGFR2 ativa as cascatas PI3K–AKT, PLCγ–PKC–MAPK/ERK, Src/FAK e vias ligadas à eNOS, que coordenam a proliferação, migração, sobrevivência e permeabilidade endoteliais. Essa via é central para programas angiogênicos e linfangiogênicos e é frequentemente estudada em contextos de neovascularização tumoral, remodelamento associado à isquemia e disfunção vascular inflamatória. A sinalização desregulada de KDR tem sido associada a alterações na integridade microvascular e a interações anômalas entre endotélio e pericitos, relevantes para a biologia de doenças cardiovasculares e oculares.

Flk-1/KDR/VEGFR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Flk-1/KDR/VEGFR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Flk-1/KDR/VEGFR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Flk-1/KDR/VEGFR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Flk-1/KDR/VEGFR2 em células tumorais com expressão de KDR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.