Plásmido Doble Nickase (h) Filamin 3: sc-402897-NIC

FLNB codifica la filamina 3, una proteína de andamiaje que se une a la actina, entrecruza la F-actina y organiza la arquitectura del citoesqueleto cortical para coordinar la forma celular, la polaridad y la estabilidad mecánica. La filamina 3 favorece la adhesión dependiente de integrinas, el agrupamiento de receptores y la mecanotransducción al acoplar proteínas de membrana a la red de actina y modular la señalización de las GTPasas de la familia Rho, influyendo así en la migración y la remodelación tisular. En biología humana, la alteración de la función de la familia de filaminas se asocia con una dinámica citoesquelética modificada y defectos en el desarrollo esquelético, y las variaciones en FLNB se relacionan con fenotipos hereditarios de displasia esquelética. Estas propiedades hacen de FLNB una diana útil para estudiar la señalización dependiente de la fuerza, la comunicación cruzada entre el citoesqueleto y la MEC, y programas morfogenéticos regulados durante el desarrollo.

Filamin 3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FLNB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FLNB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FLNB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FLNB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.