Fibulin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401978

Panoramica

EFEMP1 codifica la fibulina-3, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare che si associa alle fibre elastiche e ai componenti della membrana basale per regolare l’assemblaggio della matrice, l’adesione cellula–matrice e il rimodellamento tissutale. La fibulina-3 modula l’attività delle proteasi e il turnover della matrice extracellulare, incluse interazioni che influenzano il rimodellamento mediato da MMP/ADAMTS, ed è stata collegata a contesti di segnalazione come TGF-β/SMAD che coordinano la fibrosi e programmi epitelio–mesenchimali. Nei tessuti umani, l’espressione di EFEMP1 è rilevante per l’omeostasi vascolare e oculare, e livelli alterati di fibulina-3 sono stati associati a fenotipi di degenerazione retinica e a cambiamenti dell’architettura stromale nella biologia dei tumori. Questi ruoli rendono EFEMP1 un utile punto di partenza per studiare la regolazione della matrice extracellulare, le reti di proteine secrete e il comportamento cellulare dipendente dal microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EFEMP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EFEMP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EFEMP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fibulin-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EFEMP1 per lo studio della segnalazione di Fibulin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EFEMP1 critici per la funzione di Fibulin-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EFEMP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EFEMP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fibulin-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Fibulin-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EFEMP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EFEMP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.