Plasmide Double Nickase (h) Fibulin-1: sc-401754-NIC

FBLN1 code la fibuline‑1, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui s’associe aux fibres élastiques, aux composants de la membrane basale et à de nombreux protéoglycanes afin d’influencer l’organisation de la matrice et la mécanique tissulaire. La fibuline‑1 participe à des processus d’adhérence cellule–matrice et de remodelage qui recoupent la signalisation liée aux intégrines, les programmes de réparation des plaies et l’homéostasie de la matrice extracellulaire vasculaire. Des altérations de l’expression de FBLN1 et du dépôt matriciel ont été rapportées dans des contextes de fibrose et de remodelage cardiovasculaire, et une architecture de matrice extracellulaire dérégulée est également impliquée dans la biologie du microenvironnement tumoral. Par conséquent, FBLN1 est fréquemment étudié comme un nœud structurel et régulateur reliant l’assemblage de la matrice extracellulaire à la migration cellulaire, à la prolifération et à la mécanotransduction.

Fibulin-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FBLN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FBLN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FBLN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FBLN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.