FBXO3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-425412-LAC

O gene murino *Fbxo3* codifica a proteína FBXO3, um receptor de substratos do tipo F-box dentro dos complexos de ligase E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), que confere especificidade à renovação/degradação de proteínas dependente de ubiquitina. Por meio da degradação regulada de intermediários de sinalização, a FBXO3 pode influenciar a dinâmica da sinalização inflamatória e da imunidade inata, as respostas ao estresse celular e as vias de proteostase. A atividade alterada de proteínas F-box associadas ao SCF é frequentemente ligada à desregulação da sinalização de citocinas, a checkpoints anormais do ciclo celular e de estresse e a vias mais amplas relevantes para mecanismos de doenças inflamatórias. Assim, *Fbxo3* é um nó útil para dissecar o controle, via ubiquitina–proteassoma, da transdução de sinais e de programas transcricionais em modelos celulares murinos.

As Partículas de Ativação Lentivirais FBXO3 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Fbxo3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais FBXO3 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Fbxo3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de FBXO3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Fbxo3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.