Fatty Acid Synthase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400440-ACT

O gene humano FASN codifica a sintase de ácidos graxos, um complexo enzimático citosólico multifuncional que catalisa a síntese de novo de ácidos graxos saturados de cadeia longa, principalmente palmitato, a partir de acetil-CoA e malonil-CoA utilizando NADPH. Essa atividade integra-se ao metabolismo do acetil-CoA, ao transporte de citrato e às vias geradoras de NADPH para sustentar a biogênese de membranas, a palmitoilação de proteínas e a sinalização derivada de lipídios. A regulação de FASN está estreitamente ligada à detecção de nutrientes e a programas transcricionais lipogênicos, incluindo o controle dependente de SREBP, e contribui para as respostas celulares à hipóxia e ao estresse oxidativo por meio do remodelamento lipídico. Alterações na expressão de FASN e na lipogênese são frequentemente estudadas em contextos de disfunção metabólica e de biologia de doenças proliferativas, nos quais a disponibilidade de lipídios pode influenciar o crescimento, a tolerância ao estresse e a sinalização inflamatória.

Fatty Acid Synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FASN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fatty Acid Synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FASN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FASN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fatty Acid Synthase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FASN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fatty Acid Synthase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fatty Acid Synthase em células tumorais com expressão de FASN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.