FANCI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402229-ACT

FANCIは、複製ストレス下でゲノムの完全性を守るファンコニ貧血（FA）DNA修復経路の重要な構成要素をコードしている。DNAの鎖間架橋（interstrand crosslink）損傷が生じると、FANCIはFANCD2とともにID複合体を形成し、制御的なリン酸化およびモノユビキチン化を受けたうえで、ヌクレアーゼによる処理と相同組換えを協調させ、停止した複製フォークの再始動を可能にする。このシグナル伝達軸は、ATR依存性のチェックポイント制御および複製と連動した修復機構と連携し、染色体切断やマイクロヌクレウス形成を抑制する。FANCIの機能不全を含むFA経路制御の破綻は、遺伝性のゲノム不安定性症候群と関連しており、DNA損傷感受性や変異負荷への影響という観点から広く研究されている。

FANCI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FANCIの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FANCI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FANCI 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFANCI転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FANCIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFANCI遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFANCI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFANCI発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFANCI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。