FAM20C Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429814-ACT

Fam20c codifica a FAM20C, uma quinase proteica atípica, secretada e residente no Golgi, que fosforila proteínas extracelulares em motivos Ser-x-Glu/pSer, moldando a composição e a função da via secretória. Em camundongos, a fosforilação mediada por FAM20C regula proteínas da matriz extracelular, fatores de mineralização e componentes de sinalização secretados, conectando o processamento no Golgi ao desenvolvimento e à homeostase dos tecidos. Essa atividade se cruza com programas de osteogênese e biomineralização, e alterações na função de FAM20C têm sido associadas a defeitos na organização da matriz esquelética e dentária. Como reguladora de fosfoproteomas secretados, a FAM20C é relevante para estudos de remodelamento da matriz, comunicação célula–matriz e redes de sinalização dependentes de secreção.

FAM20C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fam20c sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAM20C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fam20c em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fam20c, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAM20C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fam20c nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAM20C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAM20C em células tumorais com expressão de Fam20c silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.