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FAM20A慢病毒激活颗粒(m) | sc-431579-LAC | 200 µl | $455.00 |
Fam20a 编码分泌通路蛋白 FAM20A。FAM20A 作为一种假激酶(pseudokinase)发挥作用,并作为高尔基体酪蛋白激酶 FAM20C 的调控伙伴,支持对细胞外基质及分泌蛋白的磷酸化。在小鼠组织中,FAM20A 参与矿化基质成分的翻译后加工与成熟,将高尔基体/分泌运输与细胞外信号传导及基质组织联系起来。FAM20A–FAM20C 依赖的磷酸化一旦受扰,可能改变生物矿化过程以及上皮—间充质相互作用,因此 Fam20a 与釉质形成、组织矿物稳态及分泌通路生物学研究密切相关。因而,对 Fam20a 的遗传或功能扰动常用于探究细胞外磷酸化蛋白组的调控以及由基质驱动的发育表型。
FAM20A 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Fam20a 表达。
FAM20A 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Fam20a转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性FAM20A表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Fam20a 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。