FAM148C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414279-ACT

O C2CD4C humano codifica a FAM148C, uma proteína putativa contendo domínio C2, implicada em processos dependentes de cálcio associados à membrana e na sinalização intracelular. Embora seus parceiros moleculares ainda não estejam completamente definidos, estudos de expressão e de associação genética relacionam o C2CD4C à regulação endócrina e metabólica, incluindo a biologia das ilhotas pancreáticas e vias relacionadas à secreção de insulina. Variações próximas ao C2CD4C têm sido associadas à suscetibilidade ao diabetes tipo 2 e a características cardiometabólicas correlatas, sustentando seu uso em estudos de regulação gênica, acoplamento estímulo-secreção e transições de estado celular metabólico. A modulação dos níveis de FAM148C pode ajudar a dissecar como nós de sinalização responsivos ao cálcio influenciam programas transcricionais em tipos celulares relevantes para a doença.

FAM148C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C2CD4C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAM148C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C2CD4C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C2CD4C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAM148C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C2CD4C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAM148C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAM148C em células tumorais com expressão de C2CD4C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.