Espin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403106

Übersicht

ESPN kodiert Espin, ein Aktin-bündelndes Protein, das an parallelen Aktinfilament-Bündeln lokalisiert und in Mikrovilli und Stereozilien angereichert ist. Espin reguliert die Architektur des Zytoskeletts, einschließlich der Verlängerung und Stabilisierung von Zellfortsätzen, und prägt dadurch die Morphologie der Zelloberfläche sowie mechanosensorische Strukturen. Durch die Modulation der Aktindynamik und Quervernetzung beeinflusst Espin Prozesse wie die Organisation des epithelialen Bürstensaums und die Aufrechterhaltung der Stereozilien von Haarzellen. Eine veränderte ESPN-Funktion wurde mit sensorischen und zytoskelettalen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Hörbiologie und aktinbasierte strukturelle Erkrankungen relevant sind.

Das Espin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ESPN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ESPN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ESPN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Espin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ESPN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Espin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ESPN-Exone abzielen, die für die Espin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ESPN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Espin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Espin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ESPN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Espin HDR-Plasmid (h) und Espin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ESPN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ESPN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.