Erg-1/2/3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400404-LAC

ERG codifica um fator de transcrição da família ETS que regula programas de expressão gênica que controlam a manutenção de células-tronco e progenitoras hematopoéticas, a diferenciação endotelial e a integridade vascular. Por meio da ligação ao DNA dependente de sequência, o ERG integra sinais de vias como MAPK/ERK e PI3K/AKT para modular proliferação, sobrevivência, adesão e comprometimento de linhagem. A atividade desregulada de ERG está fortemente associada à reprogramação transcricional oncogênica, incluindo rearranjos TMPRSS2–ERG no câncer de próstata e expressão aberrante de ERG em leucemias agudas. Essas características fazem do ERG um nó molecular amplamente utilizado para estudar o controle transcricional, o estado da cromatina e redes de especificação de linhagem em modelos de câncer e biologia vascular.

As Partículas de Ativação Lentivirais Erg-1/2/3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ERG numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Erg-1/2/3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ERG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Erg-1/2/3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ERG e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.