Plasmide CRISPR d'Activation (h) Erg-1/2/3: sc-400404-ACT

ERG code un facteur de transcription de la famille ETS (Erg-1/2/3) qui se lie à des motifs d’ADN riches en purines afin de réguler des programmes géniques contrôlant le développement hématopoïétique, la différenciation endothéliale et les décisions de destinée cellulaire. ERG intègre des signaux issus des voies MAPK/ERK et associées à PI3K pour coordonner des réseaux transcriptionnels impliqués dans la prolifération, l’adhésion et l’homéostasie vasculaire. Une expression d’ERG dérégulée ou des réarrangements d’ERG sont fréquemment étudiés dans le cadre de la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique, notamment dans les leucémies et le cancer de la prostate, et ERG est également pertinent pour l’angiogenèse et la biologie vasculaire inflammatoire. Ces caractéristiques font d’ERG une cible largement utilisée pour disséquer les circuits transcriptionnels spécifiant les lignages et les réseaux de régulation génique associés aux maladies.

Erg-1/2/3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ERG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Erg-1/2/3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ERG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ERG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Erg-1/2/3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ERG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Erg-1/2/3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Erg-1/2/3 dans les cellules tumorales présentant une expression de ERG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.