EphA5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403104-ACT

EPHA5 codifica o receptor de efrina do tipo A 5 (EphA5), uma tirosina-quinase receptora que medeia a sinalização dependente de contato por meio da ligação a ligantes ephrin-A ancorados à membrana. O EphA5 regula a orientação axonal, a formação de sinapses e o refinamento de circuitos neuronais ao coordenar a remodelação do citoesqueleto, a adesão celular e programas direcionais de repulsão/atração celular. A sinalização a jusante cruza com GTPases da família Rho, vias de MAPK e redes de quinases/fosfatases que controlam o crescimento de neuritos e a migração celular. A desregulação da sinalização Eph/efrina tem sido implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, bem como em comportamento invasivo alterado e reprogramação de vias em contextos relacionados ao câncer.

EphA5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EPHA5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EphA5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EPHA5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EPHA5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EphA5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EPHA5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EphA5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EphA5 em células tumorais com expressão de EPHA5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.