EphA3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401565-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EphA3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase EphA3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase EphA3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para EPHA3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EphA3 Anticorpo (D-2): sc-514209
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EphA3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401565-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401565-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA3 codifica a EphA3, uma tirosina-quinase receptora da rede de sinalização das efrinas-A que regula a comunicação célula–célula, o padrão de organização dos tecidos e a remodelação do citoesqueleto. Após o engajamento por efrina, a EphA3 influencia uma sinalização bidirecional que intersecta vias associadas às GTPases da família Rho, à MAPK e à PI3K para modular a adesão celular, a migração e a formação de fronteiras. A desregulação da expressão ou da sinalização de EPHA3 tem sido associada a programas de desenvolvimento alterados e a fenótipos aberrantes de crescimento e invasão em múltiplos contextos de câncer, tornando-o um nó útil para estudar orientação guiada por receptores e interações com o microambiente tumoral. Em modelos celulares humanos, a sinalização dependente de EphA3 oferece um sistema manejável para investigar a dinâmica de sinalização dependente de contato e as respostas transcricionais a jusante.
EphA3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EPHA3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EPHA3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EPHA3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EPHA3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.