EP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401146-ACT

PTGER4 codifica o receptor humano de prostaglandina E4 (EP4), um receptor acoplado à proteína G que se liga à PGE2 para estimular a adenilato ciclase e elevar os níveis de cAMP, acionando a sinalização PKA/CREB e programas transcricionais a jusante. A sinalização do EP4 interage com as vias PI3K–AKT e ERK/MAPK para modular, de forma dependente do contexto, a sobrevivência celular, a migração, a permeabilidade vascular e a produção de citocinas. Esse receptor contribui para a regulação das respostas imunes inata e adaptativa e participa de circuitos inflamatórios por meio de feedback mediado por prostaglandinas. A atividade desregulada de PTGER4/EP4 tem sido associada a fenótipos imunes e inflamatórios e é frequentemente estudada em modelos de interações tumor–sistema imune e de remodelamento tecidual.

EP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTGER4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTGER4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTGER4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTGER4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EP4 em células tumorais com expressão de PTGER4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.