Particules Lentivirales d'Activation (h) ENHO: sc-418381-LAC

ENHO code l’adropine, une hormone peptidique sécrétée impliquée dans l’homéostasie énergétique systémique et la biologie cardiovasculaire. L’adropine influence l’utilisation des substrats énergétiques et la signalisation métabolique, reliant l’état nutritionnel à des voies qui régulent la gestion du glucose, l’oxydation des lipides, la fonction endothéliale et le tonus inflammatoire. Une expression altérée de ENHO a été associée, dans des contextes de recherche, à une dérégulation métabolique, à des phénotypes liés à la résistance à l’insuline et à des traits de risque cardiométabolique, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de l’obésité, des mécanismes du diabète de type 2 et du dysfonctionnement vasculaire. En tant que facteur circulant, ENHO est également utilisé pour explorer la communication inter-organes entre le foie, le tissu adipeux, le muscle squelettique et l’endothélium.

Les particules d'activation lentivirales ENHO (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ENHO dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ENHO (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ENHO, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ENHO. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ENHO ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.