Endophilin I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402069-ACT

SH3GL2 codifica a Endofilina I, um adaptador contendo domínio BAR que molda a curvatura da membrana e coordena a endocitose mediada por clatrina nas sinapses neuronais. A Endofilina I conecta a sinalização por fosfoinositídeos à brotação e ao desrevestimento (uncoating) de vesículas por meio de interações com a dinamina e a sinaptojanina, sustentando a reciclagem de vesículas sinápticas e a internalização de receptores. Por meio desses papéis no tráfego endocítico e na remodelação do citoesqueleto, SH3GL2 ajuda a regular a neurotransmissão e a homeostase neuronal. Alterações na expressão ou na função de SH3GL2 têm sido associadas a contextos de doenças neurodegenerativas e neuropsiquiátricas, tornando-o relevante para dissecar mecanismos de disfunção sináptica.

Endophilin I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SH3GL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Endophilin I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SH3GL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SH3GL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Endophilin I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SH3GL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Endophilin I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Endophilin I em células tumorais com expressão de SH3GL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.