Plásmido CRISPR de Activación (h) Endomucin: sc-403680-ACT

EMCN codifica endomucina, una glucoproteína de tipo sialomucina enriquecida en células endoteliales vasculares, donde contribuye a las propiedades de la superficie luminal, a la modulación de las interacciones célula–célula y célula–matriz, y a la regulación de la dinámica de adhesión de leucocitos. La endomucina se integra en programas de activación endotelial y en procesos de la barrera vascular que coordinan la inflamación y la perfusión tisular. La alteración de la expresión de EMCN se ha asociado con firmas de disfunción endotelial observadas en diversos contextos de remodelado vascular, incluida la angiogénesis tumoral y fenotipos de enfermedad vascular inflamatoria. Como marcador endotelial y regulador funcional, EMCN se investiga con frecuencia en estudios de señalización angiogénica, tráfico de células inmunitarias y biología del nicho vascular.

Endomucin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EMCN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Endomucin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EMCN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EMCN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Endomucin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EMCN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Endomucin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Endomucin en células tumorales con expresión de EMCN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.