EMILIN-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406521

Panoramica

EMILIN2 codifica EMILIN-2, una glicoproteina della matrice extracellulare arricchita nelle microfibrille associate alle fibre elastiche, che contribuisce all’organizzazione della matrice e alla segnalazione cellula–matrice. EMILIN-2 interagisce con l’adesione mediata dalle integrine e con la meccanotrasduzione, influenzando la dinamica del citoscheletro, la migrazione e il rimodellamento tissutale. Attraverso questi segnali extracellulari, EMILIN2 può modulare vie legate all’infiammazione e all’omeostasi vascolare e stromale, incluse le modalità che plasmano le risposte angiogeniche e fibrotiche. Un’espressione deregolata di EMILIN2 e un’architettura della matrice alterata sono state associate al rimodellamento del microambiente tumorale e a difetti della matrice extracellulare correlati al sistema cardiovascolare, a supporto della sua rilevanza nella ricerca sui meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EMILIN-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EMILIN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EMILIN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EMILIN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EMILIN-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EMILIN2 per lo studio della segnalazione di EMILIN-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EMILIN2 critici per la funzione di EMILIN-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EMILIN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EMILIN-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EMILIN-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EMILIN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EMILIN-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EMILIN-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EMILIN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EMILIN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.