eIF2A Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-432849-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- eIF2AO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase eIF2A (m) e o Plasmídeo Double Nickase eIF2A (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Eif2a. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:eIF2A Anticorpo (3A7A8): sc-517214
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
eIF2A Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-432849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2A Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-432849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene **Eif2a** de camundongo codifica a **eIF2A**, um fator alternativo de iniciação da tradução que auxilia na entrega do Met-tRNA iniciador ao ribossomo em condições nas quais a atividade da eIF2 canônica está limitada. A eIF2A contribui para o controle translacional durante o estresse celular, conectando-se à sinalização da resposta integrada ao estresse (ISR) e a programas de tradução seletiva que ajudam a remodelar a proteostase. Ao moldar como as células iniciam a síntese proteica durante limitação de nutrientes, estresse do retículo endoplasmático (RE) ou outras perturbações, **Eif2a** influencia vias que regulam sobrevivência, diferenciação e adaptação. A desregulação da iniciação da tradução e da síntese proteica responsiva ao estresse é amplamente relevante para neurodegeneração, disfunção metabólica e biologia do câncer, tornando **Eif2a** um ponto útil para estudos mecanísticos da expressão gênica acoplada ao estresse.
eIF2A O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Eif2a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Eif2a. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Eif2a. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Eif2a interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.