EDG-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404415-ACT

S1PR4 (EDG-6) codifica um receptor acoplado à proteína G para esfingosina-1-fosfato (S1P), com funções proeminentes nos compartimentos imune e hematopoético. O EDG-6 acopla-se a nós de sinalização a jusante, incluindo PI3K–AKT, MAPK/ERK e GTPases da família Rho, para regular quimiotaxia, remodelamento do citoesqueleto, programas de citocinas e sobrevivência celular. Por meio do controle dependente de S1P do tráfego de leucócitos e da sinalização inflamatória, o S1PR4 é utilizado para estudar a homeostase imunológica, a biologia de células mieloides e respostas transcricionais dirigidas por receptores. A atividade desregulada do eixo S1P–S1PR tem sido associada à fisiopatologia inflamatória e a processos do microambiente tumoral, apoiando investigações mecanísticas sobre modulação imune e redes de sinalização oncogênica.

EDG-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S1PR4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EDG-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S1PR4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S1PR4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EDG-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S1PR4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EDG-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EDG-6 em células tumorais com expressão de S1PR4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.