E2F1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400123-ACT

E2F1 (fator de transcrição E2F1) é um fator de transcrição específico de sequência que controla a transição G1/S ao coordenar a expressão de genes necessários para a replicação do DNA, o metabolismo de nucleotídeos e a progressão do ciclo celular. Sua atividade é rigidamente regulada pelo eixo RB/E2F, integrando a sinalização mitogênica com o controle de checkpoints, e interage com a apoptose dependente de p53 e com as respostas a dano no DNA. A desregulação da sinalização de E2F1 é frequentemente associada à proliferação descontrolada, ao estresse de replicação e à instabilidade genômica observados em diversos tipos de câncer e outros distúrbios proliferativos. Como E2F1 também pode influenciar programas de apoptose, senescência e diferenciação, ele é amplamente utilizado para investigar decisões de destino celular dependentes do contexto.

E2F1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de E2F1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

E2F1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus E2F1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição E2F1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de E2F1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus E2F1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de E2F1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via E2F1 em células tumorais com expressão de E2F1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.