E2F1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400123-ACT

E2F1（E2F転写因子1）は、DNA複製、ヌクレオチド代謝、細胞周期進行に必要な遺伝子群の発現を協調的に制御することで、G1/S移行を司る配列特異的転写因子です。その活性はRB/E2F軸によって厳密に制御されており、増殖因子（ミトジェン）シグナルとチェックポイント制御を統合するとともに、p53依存的アポトーシスやDNA損傷応答とも交差します。E2F1シグナルの破綻は、がんをはじめとする増殖性疾患でみられる制御不能な増殖、複製ストレス、ゲノム不安定性としばしば関連します。またE2F1はアポトーシス、細胞老化、分化プログラムにも影響し得るため、状況依存的な細胞運命決定を解析するためのプローブとして広く用いられています。

E2F1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性E2F1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

E2F1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における E2F1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はE2F1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性E2F1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のE2F1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるE2F1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびE2F1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるE2F1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。