E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400452

Übersicht

SELE kodiert E-Selectin (CD62E), ein induzierbares Adhäsionsmolekül von Endothelzellen, das durch entzündliche Zytokine wie TNF-α und IL-1β rasch hochreguliert wird. Durch die Bindung an sialylierte, fukosylierte Liganden (einschließlich Sialyl-Lewis^x) auf Leukozyten vermittelt E-Selectin das Anheften (Tethering) und Rollen auf aktiviertem Endothel und initiiert damit die Leukozyten-Adhäsionskaskade sowie die transendotheliale Migration. Die SELE-Funktion überschneidet sich mit NF-κB–getriebener entzündlicher Signalübertragung und reguliert die vaskuläre Rekrutierung von Leukozyten, die Gewebeentzündung und Immunüberwachung mitprägt. Eine fehlregulierte E-Selectin-Expression ist mit chronischen Entzündungszuständen und vaskulärer Pathologie assoziiert und wird häufig in Studien zu Tumor–Endothel-Interaktionen sowie in Modellen der metastaserelevanten Extravasation untersucht.

Das E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SELE-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SELE-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SELE nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die E-Selectin/CD62E/SELE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SELE-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der E-Selectin/CD62E/SELE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SELE-Exone abzielen, die für die E-Selectin/CD62E/SELE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SELE-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SELE-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das E-Selectin/CD62E/SELE HDR-Plasmid (h) und E-Selectin/CD62E/SELE HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SELE-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SELE-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.