Dynein IC1, cytosolic Plasmide Double Nickase (h): sc-405213-NIC

DYNC1I1 codifica la catena intermedia 1 della dineina citosolica 1, una subunità fondamentale del complesso motore dineina–dynactin che alimenta il trasporto diretto verso l’estremità meno lungo i microtubuli. La dineina IC1 contribuisce al riconoscimento del carico e alla regolazione del motore, sostenendo il posizionamento di endosomi e lisosomi, l’organizzazione del Golgi, la dinamica del fuso mitotico e il trasporto assonale retrogrado nei neuroni. Attraverso questi processi, DYNC1I1 aiuta a coordinare il traffico intracellulare, la divisione cellulare e la segnalazione spaziale proveniente dagli organelli. La disregolazione dei componenti del complesso della dineina è spesso studiata nel contesto di meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi, nonché di instabilità cromosomica e alterazioni delle vie di proteostasi.

Dynein IC1, cytosolic Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DYNC1I1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DYNC1I1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DYNC1I1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DYNC1I1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.