DSCD75 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412188-ACT

O gene humano THEM6 codifica uma pequena proteína associada à membrana, implicada no metabolismo lipídico do retículo endoplasmático e na remodelação de fosfolipídios, processos que ajudam a coordenar a biogênese de membranas e as respostas celulares ao estresse. A atividade de DSCD75/THEM6 tem sido associada à regulação do uso de ácidos graxos e de vias de sinalização homeostáticas que acoplam a disponibilidade de nutrientes à função das organelas. A perturbação de programas de processamento de lipídios pode influenciar o equilíbrio redox, a proteostase e redes transcricionais adaptativas, tornando o THEM6 relevante para estudos de reprogramação metabólica e transições de estado celular. Padrões de expressão alterados de THEM6 têm sido relatados em diferentes conjuntos de dados transcriptômicos associados a doenças, sustentando seu uso como um nó mecanístico para investigar a desregulação de vias lipídicas em células humanas.

DSCD75 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de THEM6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DSCD75 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus THEM6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição THEM6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DSCD75. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus THEM6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DSCD75 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DSCD75 em células tumorais com expressão de THEM6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.