Plasmide CRISPR/Cas9 KO Doublecortin/DCX (h): sc-400033

Présentation

DCX code la doublecortine, une protéine associée aux microtubules qui se lie aux microtubules polymérisés et les stabilise afin de coordonner la migration neuronale, la croissance des neurites et la formation des couches corticales au cours du neurodéveloppement. La doublecortine intervient dans des programmes de remodelage du cytosquelette qui intègrent la dynamique des microtubules au positionnement du centrosome et au guidage du cône de croissance, influençant la polarisation et l’extension axonale des neurones en développement. Des variations pathogènes ou une dérégulation de DCX sont associées à des troubles neurodéveloppementaux caractérisés par une organisation corticale perturbée, notamment la lissencéphalie liée à l’X et l’hétérotopie en bande sous-corticale. En tant que marqueur de biologie cellulaire des neuroblastes en migration et des neurones immatures, DCX est largement utilisé pour étudier les trajectoires de développement et les mécanismes qui gouvernent le positionnement neuronal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Doublecortin/DCX (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DCX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DCX, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DCX à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Doublecortin/DCX.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DCX pour l'étude de la signalisation de Doublecortin/DCX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DCX essentiels à la fonction de Doublecortin/DCX
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DCX pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Doublecortin/DCX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Doublecortin/DCX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DCX. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Doublecortin/DCX plasmide HDR (h) et le Doublecortin/DCX (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DCX pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DCX définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.