Plasmide CRISPR/Cas9 KO Doublecortin (r): sc-437358

Présentation

La doublecortine (DCX) est une protéine neuronale associée aux microtubules, qui se lie à ceux-ci et les stabilise afin de réguler la dynamique du cytosquelette au cours de la neurogenèse. Elle est fortement exprimée dans les neuroblastes en migration et les neurones immatures, où elle favorise la croissance des neurites, la polarisation neuronale et la stratification corticale via le contrôle de la polymérisation des microtubules et du transport intracellulaire. DCX s’inscrit à l’interface de voies régissant la coordination actine–microtubules, le positionnement du centrosome et le guidage axonal, reliant le remodelage du cytosquelette à la mise en place des patrons de développement. L’altération de la fonction de DCX est associée à des anomalies neurodéveloppementales et à une connectivité neuronale modifiée, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un nœud mécanistique central dans les études de la migration neuronale et du développement cérébral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Doublecortin (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Doublecortin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de Doublecortin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de Doublecortin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Doublecortin plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le Doublecortin plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Doublecortin plasmide HDR (r) et le Doublecortin (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.