DDX18 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406057

Visão geral

DDX18 codifica uma helicase de RNA do tipo DEAD-box localizada no nucléolo, que acopla a remodelação de RNA dependente de ATP à biogênese de ribossomos e ao processamento de RNA. DDX18 participa da maturação do pré-rRNA, da montagem de partículas pré-ribossomais e da coordenação de respostas ao estresse nucleolar que influenciam a progressão do ciclo celular e a capacidade global de síntese proteica. A perturbação da função de DDX18 pode comprometer o processamento de rRNA e a homeostase da tradução, vinculando esse fator ao controle da proliferação e a programas de manutenção do genoma. Alterações na expressão ou na dependência de DDX18 foram observadas em estudos transcricionais e funcionais relacionados ao câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico no metabolismo de RNA associado ao crescimento.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DDX18 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DDX18 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DDX18, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DDX18 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DDX18.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DDX18 para a investigação da sinalização de DDX18, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DDX18 críticos para a função DDX18
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DDX18 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DDX18 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DDX18 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DDX18. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DDX18 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DDX18 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DDX18 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DDX18 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.