Plásmido CRISPR de Activación (h) DDAH II: sc-403032-ACT

El gen humano **DDAH2** codifica la dimetilarginina dimetilaminohidrolasa II (DDAH II), una enzima citosólica que hidroliza la dimetilarginina asimétrica (ADMA) y la L-NMMA a citrulina y dimetilamina, regulando así la actividad de la sintasa de óxido nítrico y la biodisponibilidad de óxido nítrico (NO). Mediante el control del metabolismo de las metilargininas, la DDAH II se integra en la señalización endotelial, en procesos sensibles al estado redox y en vías de homeostasis vascular que influyen en el tono del músculo liso y en la señalización inflamatoria. Alteraciones en la expresión o actividad de DDAH2 se han asociado con una señalización de NO deteriorada y fenotipos de disfunción endotelial. Estos mecanismos hacen de DDAH2 una diana relevante para estudiar respuestas al estrés cardiometabólico, la inflamación vascular y programas celulares dependientes de NO en sistemas modelo humanos.

DDAH II El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DDAH2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DDAH II El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DDAH2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DDAH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DDAH II. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DDAH2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DDAH II en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DDAH II en células tumorales con expresión de DDAH2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.