DAX-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419053

概要

Nr0b1はDAX-1（NR0B1）をコードしており、ステロイド産生組織および生殖組織で主に転写コレギュレーターとして機能する、非典型的なオーファン核内受容体である。DAX-1は、SF-1/NR5A1などの因子が制御する転写プログラムを抑制または微調整することで核内受容体シグナル伝達ネットワークを調節し、ステロイドホルモン生合成、副腎の発生、ならびに視床下部―下垂体―性腺（HPG）軸の制御に影響を与える。マウスモデルでは、DAX-1活性の変化が性腺分化、配偶子形成、内分泌恒常性に影響することが示されており、Nr0b1は発生過程における遺伝子制御やステロイド産生経路の制御を研究する上で重要なノードとなる。NR0B1オルソログの調節異常は先天性の副腎および生殖関連の表現型と関連づけられており、内分泌発生や性決定経路の機構研究における有用性を裏づけている。

DAX-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNr0b1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nr0b1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nr0b1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DAX-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DAX-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nr0b1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DAX-1の機能に不可欠なNr0b1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nr0b1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DAX-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDAX-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nr0b1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DAX-1 HDRプラスミド（m）および DAX-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNr0b1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNr0b1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。