Plásmido CRISPR de Activación (h) cytochrome c1: sc-404958-ACT

El gen humano **CYC1** codifica el **citocromo c1**, una subunidad central del **complejo III** de la cadena respiratoria mitocondrial (ubiquinol–citocromo c reductasa), que media la transferencia de electrones desde el ubiquinol al citocromo c y favorece la translocación de protones a través de la membrana interna mitocondrial. A través de su papel en la fosforilación oxidativa, el citocromo c1 contribuye a la producción de ATP, al mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial y a la homeostasis redox, con efectos posteriores sobre la señalización por especies reactivas de oxígeno y la adaptación metabólica. Las alteraciones de la función del complejo III y los desequilibrios bioenergéticos mitocondriales se asocian con frecuencia a fenotipos neuromusculares y metabólicos, y se han observado en contextos de metabolismo tumoral y otros trastornos caracterizados por disfunción mitocondrial. Por ello, la expresión de CYC1 y la integridad del complejo III se estudian ampliamente como indicadores de la regulación de la cadena de transporte de electrones, las respuestas al estrés mitocondrial y la remodelación bioenergética.

cytochrome c1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cytochrome c1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cytochrome c1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cytochrome c1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cytochrome c1 en células tumorales con expresión de CYC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.