CYP8B1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403383
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CYP8B1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CYP8B1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CYP8B1 Anticorpo (M15-P3B7): sc-101387
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CYP8B1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403383 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O CYP8B1 codifica uma enzima do citocromo P450 localizada no retículo endoplasmático que catalisa a 12α-hidroxilação de intermediários de ácidos biliares, um determinante-chave da produção de ácido cólico e da razão ácido cólico/ácido quenodesoxicólico. Ao controlar a composição dos ácidos biliares, o CYP8B1 influencia a sinalização entero-hepática por meio de FXR e TGR5, moldando o metabolismo hepático de lipídios e glicose e a homeostase mais ampla dos esteróis. A atividade alterada do CYP8B1 está associada a pools de ácidos biliares desregulados observados na doença hepática metabólica, em estados colestáticos e em condições que afetam o manejo do colesterol. Isso torna o CYP8B1 um ponto útil para dissecar programas transcricionais impulsionados por ácidos biliares e a comunicação cruzada entre hepatócitos e a sinalização intestinal.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CYP8B1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CYP8B1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CYP8B1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CYP8B1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CYP8B1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CYP8B1 para a investigação da sinalização de CYP8B1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CYP8B1 críticos para a função CYP8B1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CYP8B1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CYP8B1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CYP8B1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CYP8B1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CYP8B1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CYP8B1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CYP8B1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CYP8B1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.