Plásmido CRISPR de Activación (m) CYP2J6: sc-419921-ACT

El gen murino Cyp2j6 codifica CYP2J6, una monooxigenasa del citocromo P450 que cataliza el metabolismo oxidativo de lípidos endógenos y xenobióticos, incluida la formación de ácidos grasos epoxi bioactivos a partir de ácidos grasos poliinsaturados. Mediante la modulación de las redes del ácido araquidónico y de eicosanoides relacionados, CYP2J6 puede influir en el equilibrio redox, la señalización inflamatoria y procesos asociados al tono vascular. La variación en la expresión de Cyp2j6 es relevante para estudios del metabolismo hepático y extrahepático de fármacos, la toxicidad química y la biología de mediadores lipídicos en modelos murinos. Su actividad se cruza con vías que moldean las respuestas al estrés oxidativo y la homeostasis inflamatoria, aportando un contexto mecanístico para fenotipos cardiometabólicos e inmunometabólicos en investigación preclínica.

CYP2J6 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cyp2j6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP2J6 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cyp2j6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cyp2j6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP2J6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cyp2j6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP2J6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP2J6 en células tumorales con expresión de Cyp2j6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.