CYP27A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402836-ACT

O CYP27A1 codifica a esterol 27-hidroxilase, uma enzima mitocondrial do citocromo P450 que catalisa etapas oxidativas na biossíntese de ácidos biliares a partir do colesterol e contribui para o metabolismo de esteróis e oxiesteróis. Ao gerar intermediários como o 27-hidroxicolesterol, o CYP27A1 influencia a homeostase do colesterol, o transporte de lipídios e vias de sinalização ligadas à função mitocondrial e à regulação metabólica. A perturbação da atividade do CYP27A1 está associada à alteração da composição dos ácidos biliares e ao acúmulo de esteróis, e está implicada no distúrbio hereditário de armazenamento lipídico xantomatose cerebrotendínea (CTX). Essas funções tornam o CYP27A1 um alvo útil para estudar a oxidação mitocondrial de esteroides, a reprogramação metabólica e respostas transcricionais induzidas por esteróis em células humanas.

CYP27A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP27A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP27A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP27A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP27A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP27A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP27A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP27A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP27A1 em células tumorais com expressão de CYP27A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.