CYP11B2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405281-ACT

CYP11B2 codifica a aldosterona sintase, uma enzima mitocondrial do citocromo P450 que catalisa as etapas finais de oxidação na biossíntese de aldosterona a partir da desoxicorticosterona. Essa atividade esteroidogênica integra o metabolismo do colesterol, a transferência redox mitocondrial e a sinalização da zona glomerulosa da adrenal, conectando a homeostase de eletrólitos à regulação endócrina. A expressão de CYP11B2 é rigorosamente controlada pela angiotensina II, pelo potássio e por vias dependentes de AMPc, que modulam processos regulatórios agudos da esteroidogênese e programas transcricionais. A atividade ou expressão desregulada de CYP11B2 está associada à produção alterada de mineralocorticoides e é frequentemente estudada no contexto da esteroidogênese adrenal, de fenótipos endócrinos associados à hipertensão e de modelos de pesquisa em neoplasias adrenais.

CYP11B2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP11B2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP11B2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP11B2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP11B2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP11B2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP11B2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP11B2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP11B2 em células tumorais com expressão de CYP11B2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.