connexin 26 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402132-ACT

GJB2 codifica a conexina 26, uma proteína transmembranar de quatro passagens de junções comunicantes (gap junctions) que se monta em hemicanais hexaméricos e em canais intercelulares para mediar a transferência direta, de célula a célula, de íons e pequenos metabólitos. A conexina 26 sustenta a homeostase de tecidos epiteliais e sensoriais ao coordenar o acoplamento elétrico, a sinalização de cálcio e a sincronização metabólica, com papéis adicionais na liberação de ATP e na comunicação parácrina via hemicanais em contextos fisiológicos específicos. Essa proteína é central em redes de comunicação por junções comunicantes que influenciam a diferenciação, a função de barreira e as respostas ao estresse. Variações genéticas em GJB2 estão fortemente associadas à perda auditiva hereditária e também se relacionam a distúrbios sindrômicos que afetam a pele e seus anexos, tornando-o um gene amplamente estudado na biologia auditiva e na fisiologia epitelial.

connexin 26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GJB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

connexin 26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GJB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GJB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de connexin 26. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GJB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de connexin 26 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via connexin 26 em células tumorais com expressão de GJB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.