Conductin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401386-ACT

AXIN2 codifica a Conductina, uma proteína de andaime que atua como um regulador negativo essencial da sinalização canônica Wnt/β-catenina, ao promover a montagem do complexo de destruição da β-catenina e facilitar sua renovação/degradação. Como alvo transcricional da sinalização Wnt, o AXIN2 participa do controle por retroalimentação da amplitude e da duração da via, influenciando a especificação do destino celular, a proliferação e programas de diferenciação. A expressão ou função desregulada de AXIN2 está associada a alterações na atividade da via Wnt, implicadas em anomalias do desenvolvimento e na biologia tumoral, incluindo câncer colorretal e outras neoplasias impulsionadas por Wnt. Em modelos celulares humanos, AXIN2 serve como um marcador de leitura e modulador da dinâmica da via Wnt, relevante para a homeostase epitelial e a regulação de células-tronco/progenitoras.

Conductin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AXIN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Conductin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AXIN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AXIN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Conductin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AXIN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Conductin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Conductin em células tumorais com expressão de AXIN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.