Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cofilin 1: sc-400394-ACT

CFL1 code la cofiline 1, un régulateur central du renouvellement des filaments d’actine, qui se lie à la F‑actine et favorise la section et la dépolymérisation afin de permettre un remodelage rapide du cytosquelette. Son activité est étroitement contrôlée par une signalisation dépendante de la phosphorylation et par des voies en amont telles que l’axe Rho GTPase–LIMK–SSH, coordonnant la formation des lamellipodes, la polarité cellulaire, la cytokinèse et l’endocytose. En façonnant la dynamique de l’actine, la cofiline 1 influence la migration cellulaire, l’adhérence et la mécanotransduction, des processus souvent perturbés lors de l’invasion et des métastases cancéreuses, ainsi que dans des contextes cardiovasculaires et inflammatoires. Une dérégulation de la signalisation de la cofiline et du remodelage de l’actine a également été associée à des phénotypes neurodégénératifs, notamment à des agrégats anormaux actine–cofiline rapportés dans des modèles de dysfonction synaptique.

Cofilin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CFL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cofilin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CFL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CFL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cofilin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CFL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cofilin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cofilin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CFL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.