Plásmido Doble Nickase (h) CNT1: sc-404790-NIC

SLC28A1 codifica el transportador concentrativo de nucleósidos 1 (CNT1), un transportador de alta afinidad dependiente de sodio que media la captación celular de nucleósidos pirimidínicos como la uridina y la citidina a través de la membrana plasmática. Al controlar la vía de rescate de nucleósidos, CNT1 influye en la homeostasis del pool de nucleótidos y sostiene la síntesis de ADN/ARN, vinculando el transporte de membrana con la replicación, la reparación y la progresión del ciclo celular. La actividad de CNT1 se cruza con programas metabólicos más amplios que equilibran la biosíntesis de novo de nucleótidos frente a la vía de rescate, y su expresión alterada se ha asociado con cambios en la diferenciación epitelial y la capacidad proliferativa en múltiples contextos tisulares. En consecuencia, SLC28A1 se estudia con frecuencia en biología del transporte de nucleósidos, respuestas al estrés metabólico y mecanismos que modulan la sensibilidad a la disponibilidad de nucleósidos en modelos relevantes para enfermedades.

CNT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC28A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC28A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC28A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC28A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.