Partículas Lentivirales de Activación (h2) CEP192: sc-406971-LAC-2

El gen humano CEP192 codifica una proteína andamiaje del centrosoma esencial para la maduración centrosomal y la actividad del centro organizador de microtúbulos (MTOC), coordinando el reclutamiento del material pericentriolar y favoreciendo el correcto ensamblaje del huso bipolar durante la mitosis. CEP192 actúa en vías centrales de duplicación del centrosoma y control del ciclo celular, interactuando con reguladores como PLK1 y AURKA para sostener la nucleación de microtúbulos y la progresión mitótica. La desregulación o las mutaciones en CEP192 se han asociado con inestabilidad cromosómica y un número anómalo de centrosomas, características vinculadas a trastornos del desarrollo y a fenotipos proliferativos relacionados con el cáncer. La edición génica de CEP192 permite realizar estudios mecanísticos de la biología del centrosoma, la integridad del punto de control del huso y la estabilidad del genoma mediante modelos celulares, incluyendo imagen en células vivas y el mapeo proteómico de complejos centrosomales.

Las partículas de activación lentiviral CEP192 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CEP192 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CEP192 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CEP192, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CEP192. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CEP192 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.