CD71/TFRC/Transferrin Receptor Plasmide Double Nickase (m): sc-423504-NIC

Mouse **Tfrc** codifica **CD71/TFRC**, un recettore transmembrana di tipo II che lega la transferrina e media l’endocitosi clatrina-dipendente del ligando carico di ferro, a supporto della consegna di ferro all’interno della cellula. Regolando l’assorbimento cellulare di ferro e la segnalazione responsiva al ferro, TFRC influenza la sintesi dell’eme, la respirazione mitocondriale, la replicazione del DNA e l’omeostasi dello stress ossidativo, e la sua espressione è strettamente associata allo stato proliferativo. CD71 è particolarmente evidente nelle cellule in rapida divisione e nelle linee immunitarie, dove la richiesta di ferro è elevata, collegando la biologia di TFRC all’attivazione linfocitaria, all’eritropoiesi e alla riprogrammazione metabolica. La gestione alterata del ferro e le variazioni dell’espressione di TFRC sono spesso studiate in contesti quali anemia, infiammazione, neurodegenerazione e metabolismo del ferro associato ai tumori.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tfrc nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tfrc. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tfrc. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tfrc interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.