CD203c CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431648

概要

Enpp3 は、細胞表面に存在するエクト酵素であるエクトヌクレオチド・ピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ3（CD203c）をコードしており、細胞外ヌクレオチドを加水分解することで、プリン作動性シグナル伝達や炎症促進／抗炎症メディエーターのバランスを調節します。マウスの免疫細胞では、CD203c は細胞外ヌクレオチド代謝に寄与し、アデノシン／ATP により駆動される経路に影響を与えることで、活性化閾値、遊走、サイトカイン応答の形成に関与し得ます。その発現は好塩基球およびマスト細胞の生物学と関連付けられることが多く、脱顆粒に伴うプログラムや受容体近傍のシグナル伝達出力を調節し得ます。細胞外ヌクレオチド処理の破綻や CD203c に関連する免疫活性化状態は、アレルギー様炎症モデルやその他の免疫介在性表現型において重要です。

CD203c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEnpp3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Enpp3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Enpp3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD203cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD203cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Enpp3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD203cの機能に不可欠なEnpp3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Enpp3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD203c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD203c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Enpp3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD203c HDRプラスミド（m）および CD203c HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEnpp3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEnpp3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。