Cbl-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-407624-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cbl-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cbl-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cbl-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CBLC abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cbl-3: sc-390648
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cbl-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407624-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cbl-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407624-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBLC kodiert Cbl-3, eine RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die als Adapter für die Ubiquitinierung und die endozytotische Herunterregulierung aktivierter Rezeptor- und Nicht-Rezeptor-Tyrosinkinasen fungiert. Über seine TKB/SH2-abhängige Bindung an Phosphotyrosin-Motive und die Rekrutierung von Ubiquitin-konjugierenden Enzymen trägt Cbl-3 dazu bei, Signalstärke und -dauer in Signalwegen zu feinzujustieren, die mit Wachstumsfaktor- und Immunrezeptor-Signalisierung verknüpft sind, einschließlich Komponenten der MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Netzwerke. Die CBLC-Aktivität trägt zur Kontrolle des Rezeptor-Traffickings, der Proteostase und der negativen Rückkopplungsregulation phosphorylierungsabhängiger Signalkaskaden bei. Eine Fehlregulation von Ubiquitin-Ligasen der CBL-Familie und ihrer Substrate wurde mit veränderten zellulären Signalzuständen in Verbindung gebracht, die für onkogene Transformation und Störungen der hämatopoetischen Signalübertragung relevant sind, was CBLC zu einem nützlichen Lokus für mechanistische Studien der Signalhomöostase macht.
Cbl-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CBLC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CBLC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CBLC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CBLC-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.