cathepsin Z CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403244-ACT

CTSZ kodiert Cathepsin Z, eine lysosomale Cysteinprotease mit einzigartiger Carboxypeptidase-Aktivität und einem N‑terminalen RGD‑Motiv, das Zell–Matrix-Interaktionen beeinflussen kann. Cathepsin Z ist am endolysosomalen Proteinumsatz, an der Antigenprozessierung und an der Regulation perizellulärer Proteolyse beteiligt und verknüpft damit lysosomenabhängige Signalwege mit Protease-Netzwerken, die das Verhalten von Immunzellen prägen. Eine veränderte CTSZ-Expression wurde mit inflammatorischer Signalgebung und dem Umbau des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, wobei proteasegetriebene Veränderungen Invasion, Migration und Immunmodulation beeinflussen können. Diese Eigenschaften machen CTSZ zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung lysosomaler Proteostase, der Dynamik der extrazellulären Matrix und des Beitrags von Proteasen zu krankheitsassoziierten Zellzuständen.

cathepsin Z Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTSZ-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

cathepsin Z Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTSZ-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTSZ-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen cathepsin Z-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTSZ-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von cathepsin Z-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des cathepsin Z-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTSZ-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.