Plasmide CRISPR d'Activation (m2) C3: sc-419391-ACT-2

Le composant 3 du complément (C3) chez la souris code la protéine effectrice centrale du système du complément, dont l’activation protéolytique en C3a et C3b entraîne l’opsonisation, l’élimination des complexes immuns, la chimiotaxie et l’amplification des réponses immunitaires innées via les voies classique, lectine et alternative. Le dépôt de C3b favorise la formation de la convertase de C5 et interagit avec les récepteurs du complément pour moduler la phagocytose et le traitement des antigènes, reliant ainsi l’activité du complément à la signalisation inflammatoire et au dialogue avec les programmes de coagulation et de lésions tissulaires. Une activation dérégulée de C3 est impliquée dans des modèles de susceptibilité aux infections, de pathologies auto-immunes et médiées par des complexes immuns, de neuroinflammation et d’inflammation métabolique, ce qui reflète son influence étendue sur la défense de l’hôte et l’immunopathologie. L’édition génétique de C3 chez la souris permet des études mécanistiques des fonctions effectrices dépendantes du complément, de l’activation spécifique à chaque voie et des contributions résolues par type cellulaire à l’inflammation et à des phénotypes pertinents pour la maladie in vivo ainsi que dans des systèmes de cellules immunitaires primaires.

C3 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C3 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C3 dans les cellules tumorales présentant une expression de C3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.